Bốn năm sau khi nữ phù thủy Enchantress bị đánh bại[lower-alpha 1], Joker chia tay Harley Quinn, bỏ mặc cô lang thang khắp thành phố Gotham. Cô được cưu mang bởi Doc, ông chủ của một quán ăn Đài Loan. Cô nuôi một con linh cẩu và thường tập luyện trượt patin. Harley say xỉn trong hộp đêm của tên trùm tội phạm Roman Sionis, cô đạp gãy chân tên tài xế của hắn sau khi tên tài xế sỉ nhục cô. Nữ ca sĩ Dinah Lance đã đánh tơi tả hai tên côn đồ để cứu Harley khỏi một vụ xâm hại tình dục. Sionis ấn tượng với kỹ năng đánh đấm của Dinah và đề nghị cô làm tài xế mới của hắn. Tối hôm sau, Harley cho nổ tung nhà máy hóa chất Ace Chemicals để công khai việc cô và Joker chia tay. Trong khi đó Thám tử Renee Montoya đang điều tra một loạt vụ án mạng nhắm vào bọn xã hội đen do một hung thủ dùng nỏ gây ra. Montoya tìm thấy vòng tay của Harley tại hiện trường vụ nổ nhà máy, cô cho rằng Harley là một kẻ nguy hiểm.

Sionis giao một viên kim cương quý giá cho Dinah và tên tay sai Victor Zsasz giữ. Viên kim cương này là vật từng nằm trong số tài sản của gia đình tội phạm Bertinelli, những người đã bị thảm sát từ nhiều năm trước. Cô bé Cassandra "Cass" Cain đã ăn cắp viên kim cương từ Zsasz và nuốt nó sau khi bị cảnh sát bắt. Harley trong lúc bỏ chạy khỏi Montoya thì bị thuộc hạ của Sionis bắt giữ. Khi Sionis chuẩn bị giết Harley, cô đề nghị hắn để cô đi tìm viên kim cương về cho hắn. Sionis đồng ý nhưng hắn cũng thông báo thưởng tiền cho bất cứ tên du đãng nào trong thành phố bắt được Cassandra. Harley xông vào đồn cảnh sát với một khẩu súng phóng lựu, cô giải cứu Cassandra và cả hai chạy thoát.

Harley và Cassandra ẩn náu trong căn hộ của ông Doc. Ông Doc gặp mặt "hung thủ dùng nỏ", người tiết lộ mình là Helena Bertinelli. Cô còn sống sót sau vụ thảm sát cả nhà cô năm xưa và được huấn luyện trở thành sát thủ, cô truy sát từng tên xã hội đen để trả thù cho gia đình mình, lấy biệt danh là Huntress. Căn hộ của Harley bất ngờ bị tấn công bởi bọn tội phạm đang tìm Cassandra, ông Doc tiết lộ rằng ông ta đã bán đứng Harley để đổi lấy số tiền lớn. Harley gọi cho Sionis để hẹn gặp trao đổi ở một công viên giải trí bị bỏ hoang. Dinah thông báo với Montoya về cuộc gặp mặt của Harley và Sionis, việc này đã bị Zsasz phát hiện, hắn đã báo lại cho Sionis biết. Sionis giận dữ khi biết nữ tài xế phản bội mình, hắn đeo một cái mặt nạ và lấy biệt danh là Black Mask.

Ở công viên, Montoya đối đầu với Harley, nhưng Harley đánh cô ta rơi ra khỏi cửa sổ. Zsasz đến nơi tấn công Harley rồi đe dọa Dinah, nhưng sau đó hắn bị Helena giết. Montoya trở lại và tất cả họ có cuộc tranh cãi đến khi Sionis cử một băng đảng đến truy sát họ. Harley, Dinah, Montoya và Helena hợp sức cùng nhau đánh bại nhiều tên xã hội đen. Sionis bắt được Cassandra và đưa cô bé lên xe. Dinah thể hiện khả năng phi thường của cô là hét lớn tạo ra bão tố hạ gục những tên xã hội đen còn lại. Harley sử dụng đôi giày trượt patin đuổi theo Sionis. Đến một bến cảng, Sionis chuẩn bị giết Cassandra thì cô bé nhét một quả lựu đạn vào áo khoác của hắn. Harley ném Sionis xuống biển đúng lúc quả lựu đạn phát nổ, giết chết hắn.

Sau khi xóa sổ đế chế tội phạm của Sionis, Montoya nghỉ việc ở sở cảnh sát. Cô đi theo Dinah và Helena tiêu diệt tội phạm khắp nơi, bộ ba này tự gọi họ là nhóm Birds of Prey (Chim Săn Mồi). Harley và Cassandra bán viên kim cương cho tiệm cầm đồ, lấy tiền bỏ đi xa và bắt đầu cuộc sống mới. Trong phần cảnh hậu danh đề, Harley định tiết lộ một bí mật về Batman nhưng màn hình vụt tắt.